ほとんどの一般的な生体サンプルを長期保存する場合、-70℃という温度は広く受け入れられている効果的な標準です。これには、核酸(DNAおよびRNA)、大部分のタンパク質、細菌やウイルスなどの微生物株といった重要な材料が含まれます。この温度は、時間の経過とともにサンプル劣化を引き起こす生化学的プロセスを効果的に停止させます。
-70℃保存の核心的な原則は、ほとんどの酵素的および化学的活動の閾値をはるかに下回る温度にサンプルを置くことです。これにより、分子の完全性を数ヶ月から数年にわたって維持する、活動停止状態が作り出されます。
なぜ-70℃が研究室の標準なのか
-70℃(または-80℃のような同様の超低温)の使用は恣意的なものではありません。これは、サンプルの破壊につながる分子運動や酵素反応を停止させるための重要な閾値を示しています。
分子劣化の停止
より高い温度では、たとえ凍結されていても、ヌクレアーゼ(DNA/RNAを分解する)やプロテアーゼ(タンパク質を分解する)のような酵素は、ある程度の残存活性を保持する可能性があります。温度を-70℃まで下げることで、これらの酵素の活動を効果的に停止させ、堅牢な長期保護を提供します。
歴史的かつ実用的なベンチマーク
歴史的に、超低温(ULT)フリーザーは、約-65℃から-70℃の温度を確実に維持するように設計されていました。この技術的能力が、この温度を世界中の研究室にとって実用的かつ効果的なベンチマークとして確立し、サンプル保存プロトコルの実績ある標準を作り上げました。
-70℃保存に適した主要な材料
多くの種類のサンプルがこの温度で安定していますが、各カテゴリーの具体的な点を理解することは、その完全性を維持するために不可欠です。
核酸(DNAおよびRNA)
長期保存には、DNA、特に不安定なRNAの両方にとって-70℃が好ましい温度です。-20℃でも短期的なDNA保存には十分かもしれませんが、超低温は長年にわたる劣化に対して優れた保護を提供します。
タンパク質と酵素
ほとんどの精製タンパク質と酵素は-70℃で安全に保存されます。これにより、タンパク質分解や変性を防ぎ、タンパク質の構造と機能を維持します。これは、貴重な抗体ストック、組換えタンパク質、酵素調製物を保存するための標準的な方法です。
細菌とウイルス
-70℃の温度は、細菌およびウイルス株の生存率を維持するために不可欠です。凍結保護剤(グリセロールなど)と組み合わせることで、この温度は安定した長期アーカイブを作成し、将来の実験のために蘇生させることができます。
重要な考慮事項の理解
単にサンプルを-70℃のフリーザーに入れるだけでは不十分です。保存を取り巻く状況は、温度そのものと同じくらい重要です。
凍結融解サイクルの危険性
サンプルの完全性に対する主な脅威は、保存温度ではなく、繰り返しの凍結と融解による物理的なストレスです。このプロセスは、核酸を切断し、タンパク質を変性させ、細胞を死滅させる可能性があります。最善の方法は、最初の凍結前にサンプルを単回使用量に分注することです。
-70℃では十分に冷たくない場合
-70℃はほとんどの生物学的活動を停止させますが、完全に停止させるわけではありません。特に生存可能な細胞株や、数十年間のバイオバンキングを目的としたかけがえのないサンプルに対して、最高のレベルの保存を求める場合、液体窒素(-196℃)がゴールドスタンダードです。この温度では、すべての代謝プロセスが停止します。
凍結保護剤の役割
細菌培養物やその他の細胞タイプのような生きた材料の場合、凍結保護剤は不可欠です。グリセロールやDMSOなどの添加剤は、凍結プロセス中に細胞膜を突き破り破壊する可能性のある鋭い氷晶の形成を防ぐために必要です。
サンプルに最適な選択をする
保存戦略は、サンプルの性質と研究目標に直接合わせる必要があります。
- 核酸、タンパク質、または微生物株の日常的な長期保存が主な目的の場合: -70℃フリーザーは信頼性が高く、適切な業界標準です。
- 感受性の高い真核細胞株の生存率を維持すること、または永続的なバイオバンクを作成することが主な目的の場合: 完全な生物学的静止を保証するために、液体窒素(-196℃)での保存を使用する必要があります。
- すべての種類のサンプルでサンプルの完全性を最大化することが主な目的の場合: 最も重要な行動は、凍結融解サイクルの有害な影響を排除するために、サンプルを単回使用チューブに分注することです。
適切な保存は、再現性のある科学の基盤であり、将来にわたって生物学的材料の価値と完全性を保証します。
要約表:
| 材料の種類 | -70℃保存への適合性 | 主な考慮事項 |
|---|---|---|
| 核酸(DNA/RNA) | 長期保存に優れている | RNAに推奨。ヌクレアーゼ分解を防ぐ |
| タンパク質&酵素 | 非常に適している | 構造と機能を維持。変性を防ぐ |
| 細菌&ウイルス | 凍結保護剤と併用で理想的 | 生存率を維持。細胞にはグリセロール/DMSOを使用 |
| 真核細胞株 | 長期生存には不向き | 代わりに液体窒素(-196℃)を使用 |
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