遠心分離の応用と原理：研究室のためのサンプル分離をマスターする

本質的に、遠心分離は、遠心力を使用して溶液中の粒子を分離する技術です。基本的な原理は、沈降の自然なプロセスを加速することです。沈降とは、密度の高い成分が時間とともに混合物から沈殿する現象です。サンプルを高速で回転させることにより、遠心分離機は強力な力を発生させ、重力が必要とする時間のほんの一部で、粒子のサイズ、形状、密度に基づいて成分を分離することができます。

遠心分離の真の力は、単にサンプルを回転させることではなく、粒子の微妙な物理的差異を利用するために力を正確に適用し、複雑な混合物から選択的に単離できるようにすることにあります。

基本原理：沈降の活用

遠心分離は、液体サンプルから成分を精製し、濃縮するための信頼できる方法を提供するため、現代の生物学、化学、医学の礎となっています。効果的に使用するには、その背後にある物理学を理解することが鍵となります。

重力からGフォースへ

泥水が入ったグラスを想像してください。時間とともに、より密度の高い砂やシルトの粒子は重力によってゆっくりと底に沈みます。遠心分離機はこのプロセスを劇的に加速します。

サンプルをローター内で回転させることにより、装置は回転中心から外側に向かって作用する遠心力を発生させます。この力は、重力だけの場合よりもはるかに速く、密度の高い大きな粒子をチューブの底に向かって押し付け、緻密なペレットを形成します。

相対遠心力（RCF）とは？

ローターの速度はしばしば毎分回転数（RPM）で表されますが、この指標は不完全です。実際の分離力は遠心分離ローターの半径に依存します。

加えられる力の真の測定値は、相対遠心力（RCF）であり、gフォースとも呼ばれます。RCFは、異なる装置やローター間での力を標準化し、あらゆる遠心分離プロトコルにとって重要なパラメーターとなります。これは、遠心力が地球の重力よりも何倍強力であるかを示します。

分離に影響を与える主要因

遠心場における粒子の移動は、主に4つの特性によって決まります。

• サイズと形状： より大きく、またはより細長い粒子は、小さい球状の粒子よりも多くの抵抗を受け、異なる沈降を示します。
• 密度： 周囲の液体（媒体）よりも密度の高い粒子は沈降し、チューブの底に向かって移動します。密度の低い粒子は浮上します。
• 媒体の粘度： より濃く、粘度の高い液体はより多くの摩擦を生じさせ、すべての粒子の沈降速度を遅くします。

多様な応用に対応する技術のスペクトル

すべての遠心分離が同じというわけではありません。分離される成分と要求される純度レベルに基づいて方法が選択されます。

差動遠心分離：主力となる方法

これは最も単純で最も一般的な技術です。サンプルを、徐々に高い速度での一連の遠心分離サイクルにさらします。

各スピンの後、沈殿した物質（ペレット）は、残りの液体（上清）から分離されます。その後、上清をより高いRCFで再度スピンし、次に小さく密度の低い成分をペレット化します。これは、培養培地から完全な細胞を分離したり、主要な細胞小器官を分離したりするなど、粗い分離によく使用されます。

密度勾配遠心分離：高純度分離のために

サイズが類似した成分をより精密に分離するためには、密度勾配が使用されます。これには、スクロースや塩化セシウム（CsCl）などを使用して、遠心チューブ内の溶液を上部から下部に向かって密度が徐々に増加するように作成することが含まれます。

サンプルがこの勾配を通過するようにスピンされると、粒子は、その密度が周囲の媒体の密度と一致する点に達するか、沈降速度に基づいて明確なバンドに分離されるまで移動します。

レート・ゾーナル分離 対 アイソピクニック分離

密度勾配遠心分離には主に2つのモードがあります。

• レート・ゾーナル（速度分離）： 粒子は主にそのサイズと形状（沈降速度）に基づいて分離されます。粒子が密度平衡点に達する前にランが停止されます。これは、リボソームやポリソームなど、密度は似ているがサイズが異なる粒子を分離するのに最適です。
• アイソピクニック（等密度）： 粒子は純粋にその浮遊密度に基づいて分離されます。遠心分離ランは、各粒子が勾配内でその密度が勾配媒体の密度と等しくなる点に移動するのに十分な長さで行われます。この時点で、移動が停止します。この強力な方法は、異なるDNAアイソフォームなどの高分子を分離できます。

トレードオフの理解

遠心分離法を選択するには、速度、純度、サンプル完全性のバランスを取る必要があります。

純度 対 汚染

差動遠心分離は高速で簡単ですが、不純なペレットになりがちです。唯一の要因が沈降であるため、チューブの底近くから始まった小さな粒子が大きな粒子と一緒に共沈殿し、交差汚染につながる可能性があります。

密度勾配遠心分離は、粒子を明確なバンドに分離することで、はるかに高い純度を提供します。しかし、勾配の準備と実行には著しく時間がかかり、技術的にも複雑です。

温度制御の重要な役割

高速で回転するローターの摩擦は、かなりの熱を発生させます。タンパク質や核酸などの生物学的サンプルにとって、この熱は変性を引き起こし、その構造と機能を破壊する可能性があります。

したがって、ほとんどの高速遠心分離機（超遠心分離機）は、ラン全体を通して一定の低温（通常4°C）を維持するために冷蔵されており、サンプルの完全性を保護します。

最も一般的な落とし穴：不均衡なローター

最も重要な安全対策は、遠心分離機のバランスを取ることです。ローターに配置されたチューブは、真向かいの同じ質量の別のチューブとバランスを取る必要があります。

高速での不均衡な負荷は、ローターと遠心分離機自体を破壊する可能性のある巨大な振動とトルクを生み出し、深刻な安全上の危険をもたらします。わずかな不均衡であっても、時間とともに損傷を引き起こし、最適な分離を妨げる可能性があります。

適切な遠心分離法の選択

技術の選択は、最終的な分析目標によって決定されるべきです。

• 細胞の回収または粗いライセートの収集が主な焦点である場合： 差動遠心分離が最も迅速かつ効率的な方法です。
• 特定の細胞小器官またはウイルスの精製が主な焦点である場合： レート・ゾーナル密度勾配遠心分離は、サイズによって成分を分離するために必要な分解能を提供します。
• プラスミドDNAとゲノムDNAなど、異なる浮遊密度の分子を分離することが主な焦点である場合： アイソピクニック密度勾配遠心分離が、最高の純度を達成するためのゴールドスタンダードです。

これらの原理を理解することにより、遠心分離機を単なる回転装置から、精製と分析のための正確で強力なツールへと変えることができます。

要約表：

遠心分離技術	主な原理	一般的な応用
差動遠心分離	増加する速度での沈降速度	細胞の回収、粗い細胞小器官の分離
レート・ゾーナル（密度勾配）	サイズと形状による分離	リボソーム、ウイルス、細胞小器官の精製
アイソピクニック（密度勾配）	浮遊密度による分離	DNAアイソフォーム、プラスミドの精製

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